E.D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elansky
Oomycete Phytophthora infestans (Mont) de Bary uzrokuje kasnu plamenjaču, opasnu bolest krompira i paradajza. Jedan od glavnih izvora primarnog inokuluma P. infestans su reproduktivne odmarajuće strukture debelih zidova – oospore.
Hibridne oospore, nastale kao rezultat ukrštanja genetski različitih roditeljskih sojeva, doprinose povećanju genotipske raznolikosti u populaciji, zbog čega se ubrzava proces adaptacije sojeva na nove sorte i primijenjene fungicide.
Formiranje oospore P. infestans opaženo u terenskim uslovima u mnogim zemljama svijeta: Rusiji (Smirnov et al., 1999), Norveškoj (Hermansen et al., 2002), Švedskoj (Strömberg et al., 2001), Nizozemskoj (Kessel et al., 2002). ) i druge regije. Oospore mogu preživjeti u tlu u održivom stanju više od 2 godine (Bødker et al., 2006) i uzrokovati infekciju biljaka nakon prezimljavanja (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
Ranije je pokazano da listovi biljaka različitih slojeva grma krumpira imaju razlike u otpornosti na kasnu plamenjaču; povećava se od donjih listova do gornjih. Ovaj trend ne zavisi od starosti lista, starosti biljke ili sorte krompira (Vesper i sar., 2003). Istovremeno, u literaturi nismo uspjeli pronaći podatke o razlikama u intenzitetu formiranja oospora u listovima različitih slojeva grmlja krumpira. Međutim, ako takve razlike postoje, treba ih uzeti u obzir pri odabiru uzoraka listova za analizu formiranja oospora i pri interpretaciji rezultata drugih autora. Svrha ovog rada bila je proučavanje formiranja oospora u odvojenim listovima različitih slojeva biljke krompira smještenih u istim uslovima vlažnih komora.
materijali i metode
U radu je korišteno 5 izolata. P. infestans različiti tipovi parenja izolovani iz zaraženih uzoraka donetih iz regiona Moskve, Rjazanja i Lenjingrada. Od njih su odabrana 3 para sojeva različitih tipova parenja, koji su proizvodili obilne oospore kada su testirani u mediju sa zobenim agarom.
Za testiranje su u stakleniku (u supstratu treseta) uzgajane biljke krompira bez virusa sljedećih sorti: rani Sandrin, Zorachka, Uladar, Oziris, srednje rani Ilyinsky, srednje sezonski Yanka.
Za analizu su odabrani jednostavni listovi sa različitih nivoa biljke krompira. Tri lista su odabrana sa donjeg nivoa (4 donja složena lista), tri sa vrha (3-4 složena lista na vrhu) i tri lista iz sredine grma. Jednostavni listovi su izvagani, fotografisani na koordinatnom papiru (za izračunavanje zapremine i površine), a zatim stavljeni donjom stranom prema gore na površinu sterilne vode sipane u Petrijeve zdjelice od 25 ml. Zatim je svaki list inficiran jednom kapi miješane suspenzije zoosporangija iz izolata tipa parenja A1 i A2. Za tri lista uzorkovana sa svakog nivoa, korišćen je inokulum iz tri različita para izolata. Jedan list je inficiran mješavinom inokuluma iz jednog para izolata.
Za pripremu suspenzije zoosporangija, izolati različitih tipova parenja uzgajani su na agar podlozi zobene kaše 7 dana, nakon čega su zoosporangije isprane sterilnom destilovanom vodom. Koncentracija inokuluma bila je 5-7 zoospora po vidnom polju mikroskopa pri uvećanju od 80x. Svaki list je inficiran jednom kapi miješane suspenzije zoosporangija iz izolata tipa parenja A1 i A2.
U svim eksperimentima korišćena su 3 lista krompira po varijanti. Nakon 20 dana inkubacije na 18°C, svaki list je homogenizovan u malteru sa 2 ml destilovane vode. Iz dobivene suspenzije uzeta su 3 uzorka od kojih su pripremljeni preparati za mikroskopiju.
U svakoj varijanti ispitano je 180 vidnih polja, nakon čega je preračunat broj oospora po 1 mm.2 površina lista. Rezultati ankete za svaku opciju su prosječni.
Za izračunavanje intervala pouzdanosti (μ) za nivo značajnosti od 0,05, korištena je sljedeća formula
gdje je s standardna devijacija, n je broj mjerenja, t je t-test konstanta za nivo značajnosti od 0,05. Svi proračuni su obavljeni u Excel-u (Microsoft Office paket).
Rezultati i rasprava
Inokulacija listova sakupljenih sa različitih slojeva grma krompira i smeštenih u iste uslove vlažnih komora otkrila je razlike u intenzitetu formiranja oospora. Kod svih proučavanih sorti, maksimalni broj oospora formiran je pri inokulaciji listova sakupljenih s donjeg i srednjeg sloja grma. Nije bilo značajnih razlika u formiranju oospora u donjem i srednjem lišću.
Najmanji broj oospora formiran je u listovima gornjeg sloja (sl. 1).
U listovima donjeg i srednjeg sloja najveći broj oospora formiran je u sortama Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar i Osiris. Nešto manje intenzivno su se formirale u listovima sorte Yanka. Maksimalan broj oospora u listovima gornjeg sloja uočen je u listovima sorte Uladar, a zatim u opadajućem redoslijedu Zoračka, Oziris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin, međutim, nisu sve razlike bile statistički značajne.
Rice. 1. Formiranje oospora u listovima različitih slojeva grma krompira. Donji su listovi tri donja nivoa grma, gornji su 3-4 složena lista sa vrha biljke, srednji su sa sredine grma.
Trake greške označavaju interval pouzdanosti na nivou značajnosti 0,05.
Na terenu, formiranje oospora u donjem i srednjem lišću grma olakšavaju i mikroklimatski uslovi: veća vlažnost, smanjena sunčeva insolacija i dnevne temperaturne fluktuacije (Harrison, 1992). Prilikom prskanja odozgo, manje pesticida ulazi u donje i središnje dijelove grma. Da bi se smanjilo stvaranje oospora, treba koristiti tehnologije koje omogućavaju da se fungicidi uspješno isporuče u donje i srednje dijelove grma. Dobri rezultati se mogu postići upotrebom prskalica sa turbulentnim protokom vazduha i sistemskih fungicida koji se mogu proširiti na netretirane delove grma.
Ovaj rad je podržan od strane Ruske naučne fondacije (projekat br. 14-50-00029).
Članak je objavljen u časopisu "Zaštita krompira" (br. 2, 2015)